Koje se metode koriste za analizu nukleozida?

Bok tamo! Kao dobavljač nukleozida, iz prve sam ruke vidio važnost analize ovih malih molekula. Nukleozidi su građevni blokovi nukleinskih kiselina, koji su neophodni za sve žive organizme. Imaju ključnu ulogu u pohranjivanju i prijenosu genetskih informacija, kao iu mnogim drugim biološkim procesima. Dakle, kako analizirati te sićušne, ali moćne spojeve? Zaronimo!

Kromatografija

Jedna od najčešćih metoda za analizu nukleozida je kromatografija. Postoji nekoliko vrsta kromatografije, ali one koje se najčešće koriste za analizu nukleozida su tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti (HPLC) i tankoslojna kromatografija (TLC).

HPLC je moćna tehnika. Djeluje odvajanjem mješavine nukleozida na temelju njihovih različitih interakcija sa stacionarnom i mobilnom fazom. Stacionarna faza je obično napunjena kolona, ​​a mobilna faza je tekuće otapalo. Kako se uzorak nukleozida ubrizgava u HPLC sustav, različiti nukleozidi se kreću kroz kolonu različitim brzinama. Ovo odvajanje temelji se na čimbenicima poput veličine, oblika i polariteta nukleozida. Zatim možemo otkriti i kvantificirati svaki nukleozid pomoću detektora, kao što je UV - Vis detektor. Na primjer, ako analiziramo uzorak koji sadržiBeta - D - ribofuranoza 1,2,3,5 - tetraacetat, HPLC nam može pomoći u određivanju njegove čistoće i koncentracije u uzorku.

TLC je, s druge strane, jednostavnija i isplativija metoda. U TLC-u, mala količina uzorka nukleozida nalazi se na tankom sloju adsorbirajućeg materijala, poput silika gela. Zatim se otapalo pusti da se pomiče uz ploču kapilarnim djelovanjem. Različiti nukleozidi će prijeći različite udaljenosti na ploči ovisno o njihovom afinitetu prema adsorbensu i otapalu. Nakon što otapalo dosegne vrh ploče, možemo vizualizirati nukleozide, na primjer, pomoću UV svjetla ili reagensa za bojenje. TLC je izvrstan za brzu početnu analizu da se vidi ima li više nukleozida u uzorku i da se dobije okvirna ideja o njihovim relativnim količinama.

Masena spektrometrija

Masena spektrometrija (MS) još je jedan super koristan alat za analizu nukleozida. Ova metoda može pružiti informacije o molekularnoj težini i strukturi nukleozida. U masenom spektrometru, molekule nukleozida se prvo ioniziraju, što znači da im se daje električni naboj. Zatim se ti ioni odvajaju na temelju omjera njihove mase i naboja (m/z).

Postoje različiti načini ionizacije nukleozida. Jedna uobičajena metoda je ionizacija elektrosprejom (ESI). U ESI, uzorak nukleozida se raspršuje u finu maglu nabijenih kapljica. Kako otapalo isparava iz tih kapljica, nukleozidni ioni ostaju iza njih. Druga metoda je laserska desorpcija/ionizacija potpomognuta matricom (MALDI). Ovdje se uzorak nukleozida miješa s matričnim spojem i zatim ozračuje laserom. Matrica apsorbira energiju lasera i pomaže ionizirati nukleozide.

Nakon što se formiraju nukleozidni ioni, oni se otkrivaju i mjere se njihove m/z vrijednosti. Usporedbom ovih vrijednosti s poznatim standardima, možemo identificirati nukleozide u uzorku. MS se također može kombinirati s kromatografijom, poput HPLC - MS. Ova tehnika s crticom doista je moćna jer najprije odvaja nukleozide pomoću HPLC-a, a zatim analizira njihove mase pomoću MS-a. Na primjer, prilikom analize2-deoksiadenozin 5-trifosfat natrij, MS nam može reći ima li nečistoća u uzorku i kakve bi mogle biti njihove strukture.

Nuklearna magnetska rezonancija (NMR)

Spektroskopija nuklearne magnetske rezonancije (NMR) tehnika je koja nam omogućuje proučavanje strukture i dinamike nukleozida na atomskoj razini. Kada se uzorak nukleozida stavi u jako magnetsko polje i ozrači radiofrekventnim valovima, jezgre određenih atoma (poput vodika, ugljika itd.) u molekulama nukleozida apsorbiraju i ponovno emitiraju energiju.

NMR spektar koji dobivamo sadrži vrhove koji odgovaraju različitim atomima u nukleozidu. Položaj, oblik i intenzitet ovih vrhova mogu nam dati informacije o kemijskom okruženju atoma, povezanosti između atoma i cjelokupnoj trodimenzionalnoj strukturi nukleozida. Na primjer, ako želimo potvrditi strukturu6 - Klorogvaninribozid, NMR može pružiti detaljne informacije o položaju atoma klora, vezama između šećera i baze i drugim strukturnim značajkama. NMR je malo skuplji i dugotrajniji u usporedbi s nekim drugim metodama, ali je izuzetno vrijedan za dobivanje dubinskih strukturnih informacija.

Spektrofotometrija

Spektrofotometrija je relativno jednostavna, ali važna metoda za analizu nukleozida. Nukleozidi apsorbiraju svjetlost na određenim valnim duljinama u ultraljubičastom (UV) području. Mjerenjem apsorbancije uzorka nukleozida na određenoj valnoj duljini, možemo kvantificirati količinu prisutnog nukleozida.

U spektrofotometriji se koristi Beer-Lambertov zakon. On navodi da je apsorbancija uzorka izravno proporcionalna koncentraciji apsorbirajuće vrste (u ovom slučaju, nukleozida) i duljini puta svjetlosti kroz uzorak. Dakle, ako znamo molarnu apsorpciju nukleozida na određenoj valnoj duljini i izmjerimo apsorbanciju našeg uzorka, možemo izračunati koncentraciju nukleozida. Ova se metoda često koristi za rutinsku analizu za brzo određivanje koncentracije nukleozida u otopini.

Enzimski testovi

Enzimski testovi također se koriste za analizu nukleozida, posebno kada želimo proučavati njihovu biološku aktivnost. Enzimi su proteini koji mogu katalizirati specifične kemijske reakcije koje uključuju nukleozide. Na primjer, neki enzimi mogu razgraditi nukleozide na njihove komponente, poput šećera i baze.

Možemo mjeriti brzinu ovih enzimskih reakcija kako bismo odredili količinu nukleozida prisutnog u uzorku. Ako uzorku nukleozida dodamo poznatu količinu enzima i izmjerimo koliko brzo se odvija reakcija, možemo dobiti ideju o koncentraciji nukleozida. Enzimski testovi također su korisni za proučavanje biološke funkcije nukleozida. Na primjer, ako je nukleozid uključen u određeni metabolički put, enzimatski test može nam pomoći da shvatimo kako on stupa u interakciju s enzimima u tom putu.

Zašto su nam te analize važne kao dobavljaču

Kao dobavljaču nukleozida, točna analiza je ključna. Naši klijenti se oslanjaju na nas da ćemo pružiti visokokvalitetne nukleozide za njihova istraživanja, bilo da se radi o području genetike, razvoja lijekova ili biotehnologije. Korištenjem ovih različitih metoda analize možemo osigurati da su nukleozidi koje isporučujemo čisti, da imaju ispravnu strukturu i da su prisutni u pravim koncentracijama.

Na primjer, ako kupac koristi naše nukleozide za projekt razvoja lijekova, mora znati da su nukleozidi najviše kvalitete. Sve nečistoće ili netočne strukture mogle bi dovesti do netočnih rezultata u njihovim eksperimentima. Dakle, koristimo kromatografiju za provjeru čistoće, masenu spektrometriju za potvrdu strukture i spektrofotometriju za mjerenje koncentracije.

Kontaktirajte nas za svoje potrebe za nukleozidima

Ako ste na tržištu visokokvalitetnih nukleozida, tu smo da vam pomognemo. Imamo širok raspon nukleozida, uključujućiBeta - D - ribofuranoza 1,2,3,5 - tetraacetat,2-deoksiadenozin 5-trifosfat natrij, i6 - Klorogvaninribozid. Naše stroge mjere kontrole kvalitete, koje uključuju sve metode analize o kojima sam govorio, osiguravaju da dobivate najbolje proizvode.

Bilo da ste istraživač u sveučilišnom laboratoriju ili znanstvenik u biotehnološkoj tvrtki, spremni smo raditi s vama. Kontaktirajte nas da započnemo razgovor o vašim potrebama za nukleozidima i da vidimo kako možemo podržati vaš važan rad.

Reference

• Snyder, LR, Kirkland, JJ i Glajch, JL (2010.). Razvoj praktične HPLC metode. Wiley.
• Watson, JT i Sparkman, OD (2007). Uvod u spektrometriju mase: instrumentacija, primjene i strategije za interpretaciju podataka. Wiley.
• James, TL (1994). Nuklearna magnetska rezonanca. U Fizikalne metode u biokemiji (str. 281 - 320). Wiley - Liss.
• Keeler, J. (2005). Razumijevanje NMR spektroskopije. Wiley.
• Berg, JM, Type, JL i Stryer, L. (2012). Biokemikalije. WH Freeman.